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    背景：免疫沉淀是研究蛋白質(zhì)常用的技術(shù)，是利用抗體特異性反應(yīng)純化富集目的蛋白的一種方法。抗體與細(xì)胞裂解液或表達(dá)上清中相應(yīng)的蛋白結(jié)合后，再與蛋白A/G（ProteinA/G）或二抗偶聯(lián)的agaose或Sepharose珠子孵育，通過(guò)離心得到珠子-蛋白A/G或二抗-抗體-目的蛋白復(fù)合物，沉淀經(jīng)過(guò)洗滌后，重懸于電泳上樣緩沖液，煮沸5-10min，在高溫及還原劑的作用下，抗原與抗體解離，離心收集上清，上清中包括抗體、目的蛋白和少量的雜蛋白。

    如果蛋白樣品在孵育抗體前未經(jīng)珠子預(yù)處理，會(huì)導(dǎo)致一些非特異蛋白與ProteinA/G結(jié)合，從而干擾試驗(yàn)結(jié)果。另外如果同時(shí)加入抗體和珠子，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)沉淀效率不高的情況。

    改進(jìn)方法：

    1、預(yù)處理：在加入抗體和珠子之前，加入20-30微升50%濃度的珠子懸浮液于蛋白裂解液中，4度搖床孵育一個(gè)小時(shí)。對(duì)于經(jīng)常做IP或者CO-IP的實(shí)驗(yàn)室，可以將同一種樣品第一次預(yù)處理所用的珠子收集起來(lái)置于四度保存，以備下次沉淀同樣蛋白裂解液時(shí)預(yù)處理用。

    2、抗體，珠子分別孵育。先將適量抗體加入蛋白裂解液中，4度搖床孵育過(guò)夜。然后加入適量珠子，4度搖床孵育2到3個(gè)小時(shí)。