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    EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是人類γ-皰疹病毒家族的一個成員，是一種包膜病毒，由一個二十面體的核衣殼包圍核心DNA組成。EBV基因組可以編碼一系列能與之相互作用的或具有同源性的產(chǎn)物，包括各種各樣的抗凋亡分子、細胞因子和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白，從而促進EBV感染、永生化和轉(zhuǎn)化。

    EBV感染的B淋巴細胞主要表達的基因產(chǎn)物包括：EBV核抗原（EBNA1、EBNA2、EBNA3a、EBNA3b、EBNA3c和LP）、潛伏膜蛋白（LMP-1、LMP-2A和LMP-2B）和EBV編碼的RNA（EBER-1、EBER-2）。

    EBV是通過口咽部上皮細胞和處于休眠狀態(tài)的幼稚B細胞侵入人體的，人體初次感染EBV后，EBV基因通常不表達，能與機體形成平衡狀態(tài)，患者大多數(shù)無臨床癥狀，表現(xiàn)為潛伏感染。

    在原發(fā)感染的過程中，EBV最初在新的被感染的細胞中表達3種潛伏膜蛋白，這些蛋白可以促使靜息B細胞成為活化的中心母細胞，并能使活化的B細胞成為連續(xù)增殖的淋巴母細胞（LCL）系，這對于腫瘤的發(fā)展有重要作用。

    被激活的幼稚B淋巴母細胞在體內(nèi)迅速遷移到生發(fā)中心，在這里只有三種潛伏蛋白被表達，最終這些細胞離開生發(fā)中心成為靜息的記憶B細胞（MEMB），實現(xiàn)它的長期潛伏感染。當感染者免疫功能下降時，潛伏的EBV可被再次激活，從而引起一系列的臨床癥狀。

    微小RNA（miRNA）是一類新的非編碼小分子RNA,長約20--25個核苷酸，它在基因轉(zhuǎn)錄水平上能通過抑制或誘導(dǎo)mRNA的降解來調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄后基因的表達。miRNA代表了一種新的調(diào)節(jié)機制，通過該機制，細胞可迅速調(diào)節(jié)一系列的動態(tài)事件，如參與細胞生成、細胞增殖、細胞分化、細胞凋亡和脂肪代謝。

    已有實驗表明，miRNA參與腫瘤的發(fā)生過程，它們能與基因中的脆性位點結(jié)合，作為抑癌基因或癌基因發(fā)生調(diào)控作用。目前有8種或更多不同的miRNA參與EBV感染相關(guān)免疫反應(yīng)的基因調(diào)節(jié)，如bel-6、SMAD7、BLIMPI、NFAT5和EP300等。

    EBV的miRNA主要通過BHRF1和BART兩個區(qū)域被編碼，miRNA是目前唯一已知的BART的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。據(jù)報道，BHRF1源性的miRNA在LCL中高表達，而BART源性的miRNA被發(fā)現(xiàn)在EBV感染的細胞株中高表達。

    1 EBV相關(guān)miRNA與伯基特淋巴瘤（BL）

    地方性BL主要發(fā)生在赤道附近的非洲地區(qū)，幾乎100%與EBV感染有關(guān)，瘧疾感染在此型BL的發(fā)病機制中也起著重要作用。急性瘧疾感染會抑制EBV特異性的免疫反應(yīng)，并導(dǎo)致EBV攜帶者循環(huán)中的B細胞數(shù)目增加。

    這種免疫失調(diào)有助于解釋BL的發(fā)病機制，同時也可以幫助解釋為什么EBV相關(guān)的BL在瘧疾感染常見地區(qū)有更高的發(fā)病率。散發(fā)性BL主要發(fā)生于美國和世界各地。相對于地方性BL,免疫缺陷相關(guān)性BL和散發(fā)性BL大約只有10%--40%的病例與EBV相關(guān)。

    BL是一種同源性的疾病，幾乎所有BL都涉及c-myc基因易位，其中80%為t（8;14） （q24;q32） / mye-IgH;15%為t（2;8） （q11;q24）/ myc-IgK或5%為t（8;22） （q24;q11）/myc-Igλ；5%--10%為c-myc重排陰性。

    不管發(fā)生哪種易位，其結(jié)果是原癌基因c-mye被激活，改變細胞周期的調(diào)控，抑制細胞凋亡、促進腫瘤細胞的快速增殖增長。EBV感染存在于所有地方性BL中；而散發(fā)性BL中只有30%存在EBV感染，本地區(qū)達40%左右，Bellan等的一項研究表明，EBV陽性和陰性的BL細胞有不同的細胞起源。

    EBV陰性（多為散發(fā)性BL）的腫瘤來自于早期的中心母細胞，而EBV陽性（主要是地方性和免疫缺陷相關(guān)性BL）的腫瘤來自后生發(fā)中心B細胞，并可能在B細胞分化的不同階段涉及不同的發(fā)病機制。

    B細胞先是遵循正常生發(fā)中心的分化過程，然后，它們到達VH基因突變的生發(fā)中心，B細胞開始分化，但是在形態(tài)、免疫表型和基因表達中并不按照正常的分化過程，最后，B細胞從生發(fā)中心分化和退出。這些過程將引起bel-6的關(guān)閉，激活BLIMP-1（B細胞終末分化的主要調(diào)節(jié)器），并將反過來抑制多個靶基因，即bcl-6.

    1.1 miR.127

    Leucei等通過對BL細胞株（Raji、Akata、Ramos和Gal-1）的研究發(fā)現(xiàn)，miR-127在EBV陽性的BL中存在高表達，而在EBV陰性的散發(fā)性和地方性BL中其表達與反應(yīng)性增生的淋巴結(jié)組織表達相似，miR-127表達上調(diào)會導(dǎo)致Blimp-1和XBP-1的表達下調(diào)，并導(dǎo)致bel-6持久性表達。

    為確認在BL中miR-127的高表達與EBV有關(guān)，Onnis等用EBNA1瞬時轉(zhuǎn)染EBV陰性的BL Ramos細胞株（此株細胞miR-127為低表達），在轉(zhuǎn)染24 h后，與對照組相比，miR-127呈現(xiàn)一個內(nèi)源性的增高。由此得出結(jié)論，miR-127在EBV陽性的BL中表達上調(diào)，是受病毒產(chǎn)物EBNA1調(diào)控的。在記憶B細胞中EBNA1和miR-127的上調(diào)會導(dǎo)致BLIMP-1、XBP-1和IRF-4 mRNA的下調(diào)和bcl-6、CD.的上調(diào)。

    從而得出了EBV相關(guān)的BL發(fā)病模型：EBV感染初始B細胞，經(jīng)歷了生發(fā)中心反應(yīng)，進入記憶B細胞庫。在被感染的初始B細胞中，EBV激活B細胞的、生長程序（也稱為latency Ⅲ，這些細胞將由T細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答識別和進行免疫應(yīng)答。

    但是這些細胞中的一小部分將會進入生發(fā)中心（也稱latencyⅡ），并在生發(fā)中心發(fā)生反應(yīng)導(dǎo)致B細胞增殖、體細胞突變。在這個過程中，修飾免疫球蛋白（Ig）基因可變區(qū)的DNA被激活，生發(fā)中心B細胞最終分化為記憶B細胞或漿細胞。

    由此，病毒獲得了進入記憶B細胞的權(quán)利，并儲存于其中，在這里潛伏病毒的基因不被表達（latency 0），當通過瘧疾感染**Toll樣受體9（TLR9）引起記憶B細胞的克隆和擴增，表達EBNA1（1atency Ⅰ）和活化誘導(dǎo)胞嘧啶脫氨酶（AID）。此時細胞亞群表達EBNA1并導(dǎo)致病毒DNA的**，從而使miR-127表達上調(diào)，并再次進入生發(fā)中心進行反應(yīng)。

    AID的激活會導(dǎo)致IgH基因和c-myc基因雙鏈DNA的斷裂，將胞嘧啶（C）轉(zhuǎn)化為尿嘧啶（U），從而導(dǎo)致U和G的錯配，這樣會使染色體發(fā)生易位，如c-mye/IgH易位，從而導(dǎo)致BL的發(fā)生。

    1.2 miR.155

    有研究表明，AID為miR-155的靶基因，miR-155能與AID mRNA的3'UTR靶向結(jié)合，導(dǎo)致靶向位點發(fā)生突變，AID表達失調(diào)，造成c-myc基因易位。

    Kluiver等通過對22例c-myc易位陽性的BL和霍奇金淋巴瘤（HL）的石蠟組織標本進行研究，通過原位雜交和qRT-PCR的方法發(fā)現(xiàn)BIC（miR-155的前體B細胞整合簇）在21/22的BL中表達為陰性，少數(shù)正常淋巴組織為陽性表達，HL組織中RS細胞表現(xiàn)出強陽性miR-155在BL中的表達與BIC一致。

    有研究顯示，3/4的EBV陽性BL細胞株（JIJOYE和Raji）miR-155的表達水平與HL細胞系一致，它們都為EBV感染的latencyⅢ（LMP1和EBNA2染色為陽性）；Namalwa細胞株顯示不完整的latency Ⅲ感染（LMPI染色為陰性，EBNA2染色為陽性），在這個細胞系中miR-155只有極弱的表達；EBV陽性的BL65細胞株為latencyⅠ感染（LMP1和EBNA2染色均為陰性），BIC和miR-155的表達也為陰性。

    根據(jù)這項研究可以推測：BIC和miR-155的高表達可能與EBV的latencyⅢ感染有關(guān)。EBV latencyⅢ感染的基因產(chǎn)物L(fēng)MP1在EBV陽性的細胞中能夠誘導(dǎo)BIC的表達，LMP1對于B淋巴細胞中EBV的永生化起著必不可少的作用，它可以**NF-κB信號通路（參與免疫反應(yīng)、炎癥反應(yīng)、細胞凋亡、腫瘤發(fā)生等多個過程），誘導(dǎo)miR-155的表達。

    B-細胞受體參與脂多糖介導(dǎo)的Toll受體激活和腫瘤壞死因子-α相關(guān)的巨噬細胞的炎癥反應(yīng)，能誘導(dǎo)miR-155的表達，NF.K B信號通路在這些過程中起重要的作用。LMP1通過誘導(dǎo)miR-155的產(chǎn)生來抑制NF-κB信號通路，從而抑制宿主天然的免疫應(yīng)答，使得病毒的基因能夠持續(xù)存在。

    2 miR-146a與NK/T細胞淋巴瘤（NKTL）

    NK/T細胞淋巴瘤是一種具有高度侵襲性的淋巴瘤，主要發(fā)生于東南亞地區(qū)，占該地區(qū)惡性淋巴瘤的3%--9%.該腫瘤好發(fā)生于結(jié)外，最常見部位為鼻腔，也可見于胃腸道、皮膚、肝臟、脾臟。

    Paik等通過對50例已確診的鼻型NKTL病例、SNK6（EBV陽性的NKTL細胞株）、YT（EBV陽性的NK細胞株）進行研究發(fā)現(xiàn)，miR-146a是一種有效的腫瘤抑制基因，可以通過對其進行檢測來預(yù)測NKTL的預(yù)后。

    NF-κB通路通過誘導(dǎo)mdR-1基因及其蛋白產(chǎn)物的表達，導(dǎo)致耐藥作用的產(chǎn)生，miR-146a能抑制細胞的增殖和NF-κB的活性來加快腫瘤細胞的凋亡和增加對化療藥物的敏感性。

    EBV感染免疫細胞會導(dǎo)致LMP-1介導(dǎo)的NF-κB通路激活，NF-κB活性增強可通過負反饋作用使得miR-146a的表達上調(diào)，miR-146a的表達增加反過來抑制NF-κB的活性。

    而在一些miR-146a低表達的NKTL病例中，NF-κB的表達激活不能通過負反饋作用來誘導(dǎo)miR-146a的表達，NF-κB的活性將不受控制，導(dǎo)致細胞增殖失控和耐藥性的產(chǎn)生。miR-146a表達的調(diào)節(jié)可能受其啟動子甲基化的調(diào)節(jié)，在miR-146a低表達的NKTL病例中其啟動子處于甲基化狀態(tài)，而在miR-146a高表達的NKTL病例中其啟動子處于去甲基化狀態(tài)。

    3 EBV相關(guān)miRNA與彌漫大B細胞淋巴瘤（DLBCL）

    DLBCL具有高度侵襲性，是非霍奇金淋巴瘤（NHL）中最常見的類型，約占NHL病例的30%--40%,好發(fā)于中老年人；兒童DLBCL多見于5歲以上男性兒童，約占兒童NHL的10%.EBV感染發(fā)生于約15%的DLBCL中，有研究發(fā)現(xiàn)多個EBV相關(guān)miRNA與DLBCL的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系。

    其中miR-199、miR-23、miR-26b、miR-27b、miR-424等在EBV陽性的DLBCL病例中為高表達；miR-20b、miR-151-3p、miR-106A、miR-222等在EBV陽性的病例為低表達。Imig等通過研究發(fā)現(xiàn)EBV陽性的DLBCL中EBV相關(guān)的miR-424在其發(fā)生機制中起重要作用。miR-424的目的基因為SIAH1（E3泛素連接酶，參與調(diào)節(jié)β-catenin信號通路）。

    研究表明在DLBCL中SIAH1的表達下調(diào)可能是EBV通過阻礙各種凋亡途徑來抑制其表達。與EBV陰性的DLBCL相比，EBV陽性的DLBCL miR-424表達明顯上調(diào)，miR-424上調(diào)會導(dǎo)致SIAH1的下調(diào)，SIAH1為腫瘤抑制因子，具有誘導(dǎo)細胞凋亡的作用，其表達下調(diào)將會減弱對細胞生長、凋亡的調(diào)控作用，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。

    研究顯示我國HL病例中38%--65%EBV感染為陽性，可見EBV感染在HL中可能起重要作用。Navarro等對37例結(jié)節(jié)硬化型HL和12例混合細胞型HL的研究發(fā)現(xiàn)，在EBV不同感染狀態(tài)的混合細胞型HL中有10種miRNA的表達存在差異，在EBV陽性的病例中miR-96、miR-128a、miR-128b、miR-129和miR-205為低表達，miR-28、miR-130b、miR-132、miR-140和miR-330為高表達。

    而在結(jié)節(jié)硬化型HL病例中miR-96、miR-128a和miR-128b在EBV陽性病例中的表達低于EBV陰性病例。病毒相關(guān)的miRNA在宿主和病毒相互作用中起到重要作用，甚至能導(dǎo)致宿主miRNA表達模式發(fā)生改變，從而有利于腫瘤的發(fā)生發(fā)展。

    由此可見HL中EBV相關(guān)miRNA表達的改變不僅與其EBV感染狀態(tài)有關(guān)，還與其分型有關(guān)。同時實驗還通過研究3個不同的HL細胞系發(fā)現(xiàn)，HL與反應(yīng)增生的淋巴結(jié)組織相比有25個miRNA表達發(fā)生改變，其中有20種miRNA是HL細胞系所表達的，5種miRNA是HL細胞系中的微環(huán)境所表達的，而在這25個miRNA中只有miR-205在不同EBV感染狀態(tài)的HL病例中表達存在差異。可見除了EBV感染外仍有其他機制會導(dǎo)致HL的發(fā)生。

    5 結(jié)語

    綜上所述，EBV可以促進淋巴瘤的發(fā)生、發(fā)展，其中miRNA起著重要調(diào)控作用，隨著原位雜交、聚合酶鏈反應(yīng)等技術(shù)的應(yīng)用，miRNA在淋巴瘤中的作用機制也將越來越清晰，這將為BL的臨床診斷和治療帶來新的希望。